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流式细胞术在结核病免疫监控中的应用

发布日期：2024-04-08点击量：128次编辑：szbyjy_admin

结核病是世界最致命的传染病杀手之一。每天有近3560人死于结核病，并有近3万人罹患这种可预可治的疾病。

自2000年以来，全球抗击结核病的努力估计挽救了7500万人的生命。

世卫组织在最新发布的《全球结核病报告》中强调，2022年，结核病是世界第二大单一传染病致死病因，全球有130万人死于结核病，仅次于新冠病毒感染，造成的死亡人数几乎是艾滋病的两倍。2022年，全球估算结核病人数为1060万；其中有750多万结核病患者获得了诊断和治疗，这是世卫组织近30年前开始监测以来的最高水平。”

在刚刚过去的3月24日是第29个“世界防治结核病日”，2024年世卫组织（WHO）提出的主题是“是的，我们可以终止肺结核”。

终止肺结核一直是我们的目标，那么，结核病的预防和诊疗就显得尤为关键。在肺结核基层诊疗指南（2018年）〔1〕中指出，肺结核的治疗原则：早期、规律、全程、联合、适量。而罹患结核病患者普遍存在免疫功能异常，机体的免疫状态和结核病的发生、发展和转归密切相关〔2〕。所以在进行肺结核抗菌治疗的同时要进行免疫相关指标的监测。不仅能缩短疗程和提高疗效，且能减少耐药和预防复发同时能减轻组织损伤和改善预后〔3〕。

结核的致病菌是结核分枝杆菌（M.TB）主要为胞内寄生菌，人体感染M.TB后，首先是巨噬细胞做出反应，巨噬细胞一方面大量分泌细胞因子使淋巴细胞、单核细胞聚集到结核菌入侵部位，逐渐形成结核肉芽肿，限制、杀灭结核杆菌；另一方面，巨噬细胞的溶酶体可直接杀灭菌体。（免疫机制〔4〕具体如下图所示）

2022年发表的关于活动性肺结核患者免疫功能状态评估和免疫治疗专家共识《2021年版》〔2〕中指出：对活动性结核病患者应用免疫制剂进行免疫干预,可增强其免疫功能,从而提高治愈率,缩短疗程,同时,可清除持留菌而降低复发率。

那么对于活动性结核病患者的评估策略包含细胞因子，淋巴细胞亚群，T细胞精细分型等免疫项目检测。（流程如下）

可见在一个综合的免疫评估对结核患者的诊疗是很有必要的。

2023年北京协和医学院发表一个文章〔5〕，文章中回顾性收集北京协和医院住院ATB患者(2012年6月—2022年1月)及年龄、性别与其相匹配的健康人群(2019年3月—2022年5月)的临床资料。以健康人群为对照，分析ATB患者外周血淋巴细胞亚群变化特点，并对不同确诊方式及受累部位ATB患者进行组间比较。

结果显示：共入选符合纳入与排除标准的 ATB 患者 212 例、健康人群 200 例。ATB 患者中，临床确诊 82 例 ( 38. 7%) 、病原学确诊 130 例 ( 61. 3%，包括单纯肺结核 77 例、单纯肺外结核 21 例、肺结核并肺外结核 32 例) 。

相较于健康人群，ATB 患者多种外周血淋巴细胞亚群指标计数及其百分比降低 ( P 均＜0. 05) ，T 淋巴细胞百分比、CD8+ T 淋巴细胞百分比、记忆 CD4+ T 淋巴细胞/CD4+ T 淋巴细胞比值、CD38+ CD8+ T 淋巴细胞/CD8+ T 淋巴细胞比值等均升高 ( P 均＜0. 05) 。

相较于临床确诊 ATB 患者，病原学确诊 ATB 患者淋巴细胞、B 细胞、自然杀伤 ( natural killer，NK) 细胞、T 淋巴细胞、CD4+ T 淋巴细胞、CD8+ T 淋巴细胞计数等均降低 ( P 均＜0. 05) 。不同结核感染部位的患者记忆 CD4+ T 淋巴细胞、纯真 CD4+ T 淋巴细胞、CD28+ T 淋巴细胞及活化 CD8+ T 淋巴细胞亚群计数及其百分比无显著差异 ( P 均＞0. 05) 。

相较于单纯肺结核患者，肺结核并肺外结核患者 B 细胞计数［23 ( 10，69) 个/μL 比 73 ( 25， 133) 个/μL，P= 0. 003］降低，单纯肺外结核患者 NK 细胞百分比［16. 7% ( 10. 8%，23. 6%) 比 10. 6% ( 5. 3%，17. 4%) ，P= 0. 042］升高。

最终得到结论：活动性肺结核患者外周血淋巴细胞亚群指标整体呈减低状态，存在明显的免疫功能紊乱。

这也为结核的免疫诊疗提供了数据支撑。除淋巴细胞亚群外，结核患者的外周血中的细胞因子和Treg的表达也出现了不同趋势和幅度的变化，进一步证实了结核的发病机制及免疫干预对其诊疗的作用。

Treg细胞仅占外周血Ｔ细胞的3%-5%，主要通过抑制效应细胞的功能发挥免疫抑制的作用。

研究表明^〔6〕，肺结核患者外周血中的 Treg 细胞的百分率显著升高。在 TB 的免疫反应中，Teff及Treg细胞向病理部位的募集并参与 TB 的炎症反应对 T B 的免疫调节至关重要，Treg/Teff的平衡决定局部处于促炎状态或抑炎状态，最终决定着感染的结局。

细胞因子作为很重要的感染炎症标志物，在结核感染的过程中，也有非常重要的作用，相对于淋巴细胞亚群和调节性T细胞的变化，细胞因子的变化水平不仅可以作为风险预警，疗效评估和预后判断的指标，同时多因子（IL-6+IL-8+IFN-γ）〔7〕的联合诊断也可以大幅度提高敏感度和特异性。细胞因子参与结核病的发生，发展与转归，将其作为一个免疫治疗新的治疗靶点，也有很好的效果，《共识》〔2〕指出重组IL-2和重组IFN-γ已在结核治疗领域发挥着重要的作用。

所以对结核病患者进行细胞因子的检测不仅可以关注其疗效及免疫状态，还可对结核患者进行早期的风险预警及后期药物治疗指导。

(1) 结核病患者通常存在固有免疫和适应性免疫功能方面的异常或免疫功能低下；

(2)通过检测结核病患者淋巴细胞亚群，T亚群精细分析，细胞因子及Treg细胞评价其免疫功能状态，可为临床制定免疫干预措施提供依据；

(3)对结核病患者进行免疫治疗，可增强其免疫功能，提高治愈率，缩短疗程清除持留菌，降低复发率。

参考文献

中华医学会. "肺结核基层诊疗指南(2018年)." 中华全科医师杂志 18.008(2019):709-717.[1
中国人民解放军总医院第八医学中心全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室等. "活动性结核病患者免疫功能状态评估和免疫治疗专家共识(2021年版)." 中国防痨杂志 44.1(2022):19.
杨松, and 唐神结. "结核病免疫治疗专家共识(2022年版)." 中华结核和呼吸杂志 007(2022):045.
龚文平米洁吴雪琼. "免疫活性物质:结核病和非结核分枝杆菌病治疗的新选择." 中国防痨杂志 44.11(2022):1107-1121.
谢蓝田等. "212例活动性结核病患者外周血淋巴细胞亚群特点:单中心描述性研究." 协和医学杂志 (2023).
李浩然等. "调节性T细胞在调控抗结核免疫过程中的研究进展." 中华结核和呼吸杂志 45.5(2022):8.
古丽比克·木拉提等. "细胞因子联合检测在结核病辅助诊断中的应用价值." 新疆医学 53.5(2023):524-527.

来源：唯公科技

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